- 栏目:试验研究
- 作者:白 扬，仪泽会
- 关键词:芦笋；SSR-PCR反应体系；正交设计
- DOI:10.16861/j.cnki.zggc.202423.0084
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摘 要：以芦笋幼叶为材料，采用单因素与L16（43）正交试验相结合的方法，对影响芦笋SSR-PCR反应的3个因素（2×Taq Master Mix，模板DNA，引物）进行优化，并以此为基础通过退火温度和循环次数试验筛选引物最佳退火温度和循环次数。结果表明，芦笋基因组DNA的SSR-PCR最优反应体系为：10 µL反应体系中，50 ng·µL-1 DNA模板0.125 µL，10 µmol·L-1 上下游引物各0.5 µL，2×Taq PCR Mix 3 µL，灭菌ddH2O 5.875 µL。PCR扩增程序为：94 ℃预变性4 min；94 ℃变性30 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸35 s，循环25次；72 ℃延伸10 min，4 ℃保存。经5对引物组合和5个不同芦笋品种DNA扩增验证，该体系稳定可靠，可用于芦笋遗传多样性分析、种子纯度鉴定、分子标记辅助育种及重要农艺性状的图位克隆等工作。