青花菜×甘蓝杂种游离小孢子培养关键因素研究

摘 要：青花菜×甘蓝杂种材料在减数分裂过程中能够产生多种配子类型，产生变异程度较大的新资源，为优化青花菜×甘蓝杂种材料游离小孢子体系，获得优质的青花菜双单倍体（double haploid，DH）植株，丰富种质资源。对5份青 花菜材料和1份甘蓝材料杂交获得的F₁分别进行游离小孢子培养，探究花蕾各时期的形态学特征；并研究基因型、蔗糖浓度、4 ℃处理花蕾时间、32 ℃处理小孢子时间等关键培养因素对小孢子出胚率的影响。结果表明，5 份F₁材料花蕾的P/A（花瓣长度/花药长度）值为0.8~0.9之间时，花蕾中单核靠边期的小孢子占比为60%~70%，最适宜取样；5 份材料均能够产生胚状体，胚诱导率为0.52~16.79 胚·蕾^-1，材料H1（23ZXQ1×LC18）的胚诱导率最高，为16.79 胚·蕾^-1，后续采用此材料分别进行不同预处理试验。小孢子在 N17（含17%蔗糖浓度的NLN液体培养基）中预处理，胚诱导率最高，为8.93 胚·蕾^-1；花蕾在 4 ℃处理3 d，小孢子胚诱导率最高，为10.01胚·蕾^-1；小孢子在32 ℃处理3 d，胚诱导率最高，为17.96 胚·蕾^-1。综上所述，5 份F₁材料花蕾的P/A 值介于0.8~0.9时，花蕾中单核靠边期小孢子占比最多，可作为花蕾取样的判断标准；花蕾在4 ℃预处理3 d、用N17培养基在32 ℃预处理小孢子3 d，能够明显提高出胚率。