辣椒番茄斑萎病毒荧光定量检测方法的建立

摘 要：番茄斑萎病毒对辣椒生产造成了严重的危害，为快速、准确检测该病毒，基于甘肃省辣椒病样上发现的番茄斑萎病毒（tomato spotted wilt virus，TSWV）基因组序列设计特异性引物，建立了检测TSWV的SYBR Green Ⅰ 荧光定量PCR 检测方法（RT-qPCR），并对此检测方法的特异性、灵敏度和重复性进行了评估。结果表明，质粒标准品在1.19×10³~1.19×10⁸ 拷贝数·μL^-1浓度区间内Ct值与模板浓度的对数呈良好的线性关系，相关系数R²=0.997 8，标准曲线方程为y=-3.353 7x+34.667。建立的荧光定量PCR方法能特异性地检测TSWV，最低检测限为11.9 拷贝数·μL^-1，是普通PCR 灵敏度的100 倍；重复间变异系数为0.19%~2.67%，表明该方法重复性良好。利用RT-qPCR对田间采集的15份辣椒叶片样品进行TSWV检测，结合植株病症，确定辣椒植株显现TSWV症状的病毒载量阈值为10³拷贝数·μL^-1。本研究结果可实现番茄斑萎病毒的快速检测，为辣椒TSWV的风险评估和种植管理提供科学依据。