- 栏目:试验研究
- 作者:韩鑫，郭金菊，张惠尧，吴廷全，张长远
- 关键词:苦瓜；McPDS；基因克隆；载体构建；基因编辑
- DOI:10.16861/j.cnki.zggc.202423.0742
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摘 要：以苦瓜八氢番茄红素脱氢酶（phytoenedehydrogenase，PDS）基因为靶标，构建其特异gRNA的CRISPR/Cas9基因编辑载体，以期为建立苦瓜CRISPR/Cas9基因编辑技术体系奠定基础。以苦瓜自交系B07叶片cDNA为模板，同源克隆苦瓜McPDS基因CDS序列。结果表明，McPDS基因CDS序列全长1731 bp，编码576个氨基酸，蛋白质相对分子质量为64.44 kD，理论等电点（PI）为7.09。跨膜结构分析结果表明，该蛋白为亲水性非跨膜蛋白。系统进化树分析结果表明，McPDS与黄瓜、甜瓜等葫芦科植物中的PDS蛋白同源性较高。此外，以McPDS为靶标基因，在5’端筛选2个高特异性靶点，经设计引物，成功构建1个双靶点CRISPR/Cas9基因编辑载体，为苦瓜基因编辑体系的建立奠定了技术基础。