- 栏目:试验研究
- 作者:孙旭红，张金鹏，王磊，李明雪，丁凯鑫，李志新，杨梦平，白艳菊，宋继玲
- 关键词:马铃薯；帚顶病毒；三重；RT-PCR 检测
- DOI:10.16861/j.cnki.zggc.2025.0819
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摘 要：马铃薯帚顶病毒（potato mop-top virus，PMTV）是马铃薯重要的检疫性病毒，严重危害马铃薯的产量和品质。为高效、灵敏地检测马铃薯中的PMTV，本研究基于PMTV 编码复制（RNA1）、外壳蛋白（RNA2）和移动（RNA3）的三条独立基因组RNA，针对RNA1 设计特异性引物，筛选RNA2 与RNA3 已发表引物，并优化反应条件，成功构建PMTV 的三重逆转录聚合酶链式反应即RT-PCR 检测体系。该检测体系对PMTV 具有高灵敏度和强特异性，最低检测限为0.1 ng· μL-1 cDNA，且可同时检测到RNA1（265 bp）、RNA2（460 bp）和RNA3（769 bp）3 段目的基因，无交叉反应。利用该检测体系对来自云南、广东、贵州等地的200 份马铃薯样品进行检测，共发现24 份阳性样本，阳性率为12%。该体系可稳定检测不同组织类型（叶片、试管苗、块茎）样品，适用于田间样本快速筛查与种薯质量监测。此外，基于9 份阳性样本的3 段目的基因序列构建的系统进化树显示，我国PMTV 分离株分布于多个进化分支，提示其可能存在不同来源或本地适应性演化。本研究建立的三重RT-PCR 检测体系为PMTV 的快速检测、分子流行病学调查及种薯健康认证提供了可靠技术手段。